产品描述:Taq DNA polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶,其分子量为94kD。除了5'→3'聚合酶活性外,Taq DNA polymerase还具有 5'→3'外切酶活性和PCR产物3'端加A的脱氧核苷转移酶活性。
来源:重组大肠杆菌
规格:5U/μL
活性单位定义:1单位活性定义为74℃,30分钟内,掺入10nmoles的dNTP到酸性不溶物质所需的酶量。
酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl (pH7.9, 25℃), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 0.5% Tween20, 0.5% NP40, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol
配套溶液:10X Reaction Buffer, Cat#ON-012, 100mM Tris-HCl, 500mM KCl, pH9.0, 25℃; 100mM MgCl2, Cat#ON-013.
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1. 建议反应体系:
终体积 | 终浓度 | |
10X Reaction buffer | 5μL | 1X |
dNTP Mix, 10mM each | 1 | 0.2mM each |
25mM MgCl2 | 3 | 1.5mM |
上游引物 | X μL | 0.1-1.0μM |
下游引物 | Y μL | 0.1-1.0μM |
Taq (5U/μl) | 0.25μL | 1.25U |
模板DNA | Z μL | <0.5μg/50μL |
Nuclease-Free H2O | to 50μL |
2. 建议反应条件:
循环 | 时间 | 温度℃ | |
起始变性 | 1 | 2min | 95 |
变性 | 0.5-1min | 94 | |
退火 | 25-40 | 0.5-1min | Tm-5 |
延伸 | 1min/kb | 72 | |
最终延伸 | 1 | 5min | 72 |
最佳反应浓度:0.5U-5U per 50μL反应体积 (对于50ul反应体积:推荐1.25U)
最佳MgCl2浓度:1.5mM (1~5mM)
储藏温度:-20℃
质控检测:无DNase、Nickase、RNase污染、无16s rDNA污染
纯度:SDS-PAGE纯度:大于95%
1. Lawyer FC,et al. PCR Methods Appl. 2(4):275-87(1993).
2. Chien A, Edgar DB, Trela JM.J. Bacteriol 127(3):1550-7(1976).