产品描述：Vaccinia Capping enzyme是经大肠杆菌表达、纯化的来源于牛痘病毒的重组蛋白。能特异性将7-甲基鸟苷酸帽子结构(cap 0) 加至RNA的5'端。cap结构有助于真核生物mRNA的稳定，转运，翻译。Vaccinia Capping enzyme由D1R，D12L双亚基组成，具有三种酶活性（RNA三磷酸酶活性，鸟苷酸转移酶活性；鸟嘌呤甲基转移酶活性）。在体外转录，加帽过程需要Vaccinia Capping enzyme，GTP，甲基供体(SAM)。

来源：重组大肠杆菌

规格：10U/μL

活性单位定义：1单位酶活定义为37℃，1小时掺入10 pmols GTP到80nt转录产物所用的酶量。

酶存储缓冲液：20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol.

配套溶液：10X Capping Buffer, Cat#ON-073, 500mM Tris-HCl, pH8.0, 50mM KCl, 10mM MgCl₂, 10mM DTT; S-adenosylmethionine (SAM), 32mM, Cat#ON-074; 10mM GTP, ON-075.

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10X Capping Buffer, Cat#ON-073

10mM GTP, Cat#ON-075

S-adenosylmethionine (SAM),32mM, Cat#ON-074

1. 反应体系中不能含有EDTA；

2. 如为了RNA的稳定性，而加入核糖核酸酶抑制剂，按手册中反应体系加入至终浓度为1U/μL即可；

3. 在pH7.0-8.0，SAM不稳定，每次反应前需要新稀释SAM至2mM；

4. 在反应前，应对RNA进行热处理，保证转录产物的5'末端二级结构打开；对高二级结构的RNA可以提高热变性条件，如65℃ 20分钟，或75℃ 10分钟，或85℃ 5分钟；

5. Vaccinia Capping Enzyme 和 2'-O-methyltransferase 可以一起反应用于生产Cap1结构的RNA；

6. 对部分已知的含有复杂5'结构的RNA,反应时间可以延长至3小时。

储藏温度：-20℃

质控检测：无DNase，RNase污染

纯度：SDS-PAGE纯度：大于95%

1. Otto J.P. Kyrieleis, Jonathan  Chang, Marcos de la Pena, et al. Structure. 22, 452-465(2014).

2. Konarska, M.M. et al., (1984) Cell 38, 731.

3. Kuge, H. et al., (1998) Nucl. Acids Res. 26, 3208.