产品描述:RNase III, E.coli是同源二聚体,二价金属依赖的核酸酶。RNase III, E.coli作用于长的双链RNA(dsRNA),产物为12-30bp的dsRNAs,且为5'-PO4, 3'-OH,3'端突出两个核苷酸。
来源:重组大肠杆菌
规格:0.5U/μL
活性单位定义:1单位活性定义为37℃、20分钟内,降解1μg dsRNA为siRNA所需的酶量。
酶存储缓冲液:500mM NaCl, 20mM Tris-HCl (pH8.0, 25℃), 0.5mM EDTA, 0.5mM DTT, 50% Glyercol.
配套溶液:
10X RNaseIII Reaction Buffer, Cat#ON-078, 500mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 500mM NaCl, 10mM DTT
10X MnCl2, Cat#ON-079, 200mM MnCl2
10X EDTA, Cat#ON-080, 500mM EDTA
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建议的操作规程:
1. 按照顺序加入下列试剂:
ddH2O | X μL |
10X RNaseIII Reaction Buffer | 10μL |
dsRNA | X μL(10μg) |
RNase III | 10-20 units |
10X MnCl2 | 10μL |
Total Volume | 100μL |
2. 混合后,37℃反应20分钟。
3. 加入10μL 10X EDTA终止反应。
储藏温度:
长期储存 (使用频率低时): -70℃
每周或者每天使用: -20℃*
不能储存在无霜冰箱中。
尽量避免反复冻融,避免放在温度经常变化的地方。这些温度波动会大大的降低产品的稳定性。
*RNase III 储存在-20℃ 可能会有浑浊的现象产生,将酶置于室温,待温度达到4~10℃,然后轻轻混合,酶会澄清,并且酶活几乎没有损失。
质控检测:无DNase,Nickase污染,通过功能检测
纯度:SDS-PAGE纯度:大于90%
1. Hugh D. Robertson, Robent E. Webster, and Norton D. Zinder. The Journal of Biological Chemistry. 243, 82-91(1968).
2. Neelam Srivastava and Rai Ajit K Srivastava. Biochemistry and Molecular Biology International. 39, 171-180(1996).